Çekildikten hemen sonra yaklaşık 10 ml kan, 2 ml %0.05 heparin | DÜZ GERÇEKLER TÜRKİYE

Çekildikten hemen sonra yaklaşık 10 ml kan, 2 ml %0.05 heparin çözeltisi içeren tüplere yerleştirildi. Doku kültürleri için aşı olarak, tam kanın 0,5 ml ila 2,0 ml arasında değişen miktarları kullanıldı. Yukarıda tarif edildiği gibi antibiyotiklerin eklenmesinden sonra, materyal sığır amniyotik sıvı ortamında öğütülerek %10 dışkı süspansiyonları hazırlandı.

Süspansiyonlar daha sonra 5450 rpm'de yaklaşık bir saat santrifüjlendi ve süpernatan sıvılar aşı olarak 0.1 ml ila 3 ml arasında değişen miktarlarda kullanıldı. Tüm örnekler su ve buz içinde soğutuldu veya toplanma anından kültürlere eklenene kadar yaklaşık 5°C'de soğukta tutuldu. Örneklerin toplanması ile aşılama arasında geçen maksimum süre 3 5 saattir.

Doku kültürü teknikleri.

İlk izolasyon girişimlerinde insan böbreği, insan embriyonik akciğeri, insan embriyonik bağırsağı, insan rahmi ve rhesus maymun testislerinin silindir tüp kültürleri(1112) kullanıldı. İzole edilen ajanların sonraki pasajları daha sonra insan böbreği, insan embriyonik derisi ve kası, insan sünnet derisi, insan rahmi, al yanaklı maymun böbreği ve embriyonik civciv dokusunda denendi. Youngner(13) tekniğine göre tripsinize edilmiş insan ve rhesus maymun böbreği ile hazırlanan sabit kültürler daha sonra ajanların izolasyonu ve geçişi için kullanıldı. Kültür ortamı sığır amniyotik sıvısı (%go), sığır embriyo ekstraktı (50/0), at serumu (%5), antibiyotikler ve hücre metabolizmasının bir göstergesi olarak fenol kırmızısından(12) oluşuyordu. İnsan ve maymun böbreğinin kültivasyonu için kullanılmadığı sürece bu besiyerine soya fasulyesi tripsin inhibitörü ilave edildi.
(11) Sıvılar genellikle 4-5 gün aralıklarla değiştirildi. Histolojik inceleme için, %10 formalin içinde fiksasyondan sonra hücre büyümesi, kolodion içine gömüldü, kurutuldu ve hematoksilen ve eozin ile boyandı.